你對咖啡因有多上癮？

一、前言

我們都知道腺苷被認為是調節睡眠的因子之一。當我們感覺非常累，覺得自己再不休息就要掛點的時候，腺苷和腺苷受體結合發生各種反應，你的神經細胞活動減弱，隨之就產生了睡意。接著我們來看看咖啡因究竟都發揮了什麼功能？咖啡因進入與腺苷競爭受體，細胞感測不到腺苷，因此便發揮了提神的效果。咖啡因是一種黃嘌呤生物鹼化合物，是一種中樞神經興奮劑，能夠暫時的驅走睡意並恢復精力，臨床上用於治療神經衰弱和昏迷復甦。咖啡因可以讓人們保持警覺。

咖啡因可以刺激大腦且使人輕微上癮，也許正是基於這些功效，咖啡因才被廣泛添加於食品、飲料中。適度地使用咖啡因具有舒張血管、促進血液循環、預防高血壓、心肌梗塞、利尿、解毒、抗氧化、抗衰老、減肥等藥理和生理作用。迅速發展的含咖啡因食品業已經引起了美國食品及藥品管理局（FDA）的關注。儘管FDA尚未對咖啡因採取監管措施，而且認為一天攝入400毫克以下的咖啡因「通常不會產生危及健康的負面影響」，但FDA目前正在重新考慮開始監管咖啡因，因為各家廠商在許多產品中，加入了高劑量的咖啡因，而且每份產品的量也很大。雖然聽起來只有咖啡才像是含有咖啡因的，但各種能量飲料含有多種成分，因此實際效果可能比咖啡更強，像我們最能接觸到的可樂也曾一度被爆出咖啡因含量過高。FDA擔憂，全天累計攝入咖啡因過多可能導致依賴性。

目前有關咖啡因檢測分析的研究報導不多，為此本文通過使用SPE 1000全自動固相萃取系統對人體血液中咖啡因進行回收率測定分析，探索血液咖啡因樣本檢測的方法。

二、儀器設備及試劑

1. 儀器設備

• 固相萃取儀：SPE 1000全自動固相萃取系統
• 濃縮儀：MV5多通道平行濃縮系統
• 高效液相色譜儀：LC600 高壓梯度高效液相色譜
• 固相萃取柱：Waters HLB 60mg/3mL

2. 試劑

• 咖啡因標準儲備液：100μg/mL
• 咖啡因標準工作液：取1mL標準儲備液放入10mL容量瓶中，用甲醇定容配製成10μg/mL標準工作液
• 甲醇
• 乙酸乙酯
• 磷酸二氫鈉
• 磷酸氫二鈉
• 磷酸鹽緩衝液 (pH=6): 12.1g 磷酸二氫鈉和 1.75g 磷酸氫二鈉溶於 1L 水中
• 洗脫液：甲醇：乙酸乙酯=1:1（V:V）
• 血液替代品：牛血清，市售

三、實驗過程

3.1 全自動固相萃取過程

加標樣品預處理

取血液樣本1mL加入磷酸鹽緩衝液1mL平衡，加入50μL標準工作液，混合均勻，加標濃度為500ng/mL，待固相萃取。

3.2 固相萃取濃縮過程

將加標樣品置於SPE 1000的樣品架上，按照圖1的固相萃取方法進行血液中咖啡因的萃取淨化。洗脫液經MV5在40℃下氮吹濃縮近幹後，用流動相定容至1mL 。

圖一、血液中咖啡因固相萃取方法

3.3 HPLC-UV分析

• 色譜柱：Promosil C18，5μm，4.6*150mm
• 波長：272nm
• 流速：1mL/min
• 柱溫：40℃
• 進樣量：20μL
• 流動相：甲醇-水= 24：76

四、加標回收率結果

4.1 咖啡因標樣層析圖

圖二、咖啡因標樣的層析圖

4.2 加標樣品層析圖

圖三、加標樣品層析圖

圖四、空白樣品層析圖

4.3 加標回收率結果

通過計算得到該方法中咖啡因的加標回收率及平行性結果(見表一)。咖啡因的加標回收率為95.8~99.2%，平行性RSD 為1.6%。

表一、測定結果

五、結果與討論

本方法用SPE1000全自動固相萃取系統與MV5多通道平行濃縮系統連用，對血液中咖啡因進行萃取淨化，其加標回收率95.8~99.2%，重複性RSD為1.6%。在萃取和濃縮過程中，上樣管、收集管和濃縮管是通用的，不需要液體轉移，減少損失，便於操作，說明SPE1000與MV5聯用適用於血液中咖啡因的檢測，操作過程簡便並且在回收率和平行性上表現優異。